• 2022-07-29
    原生质体分离和纯化的方法有哪些?
  •  原生质体是指去除细胞壁后仅由质膜所包围的具有活力的裸露细胞。 原生质体培养程序包含: 原生质体分离、 原生质体纯化、 原生质体培养、 原生质体胞壁再生、 细胞团和愈伤组织的形成及植株再生。(1) 原生质体的分离一般而言, 植物的各个器官, 如根、 茎、 叶、 子叶、 下胚轴、 果实、 种子及其愈伤组织和悬浮细胞都可以作为分离原生质体的材料。 分离方法包括:①机械分离法先将细胞放在高渗糖溶液中预处理, 待细胞发生轻微质壁分离, 原生质体收缩成球形后,再用机械法磨碎组织, 从伤口处可以释放出完整的原生质体。②酶解分离法用细胞壁降解酶, 脱除植物细胞壁, 获得原生质体的方法。 常用的细胞壁降解酶种类有纤维素酶、 半纤维素酶、 果胶酶、 蜗牛酶、 胼胝质酶等。(2) 原生质体的纯化酶解后的原生质体溶液中, 有完整的原生质体、 破碎的原生质体、 未去壁的细胞、 细胞器及其他碎片。 这些在原生质体培养中, 会引起干扰作用, 必须清除。 只有经过纯化的原生质体才能进行培养。 纯化的方法如下:①过滤—离心法利用比重原理, 在具有一定渗透压的溶液中, 先进行过滤然后低速离心, 使纯净完整的原生质体沉积在试管底部。 此法比较简单, 但原生质体沉积在试管底部相互挤压, 会引起原生质体的破碎。②悬浮法采用比原生质体比重大的高渗溶液, 使原生质体漂浮在溶液表面。 此方法同样需要经过离心过滤, 将大小残渣滤去, 得到较为纯净、 完整的原生质体。 但由于高渗溶液对原生质体常有破坏, 因而完好的原生质体量较少。③界面法采用比重不同的溶液, 使原生质处于两液相的界面之中。 此法可以收到较多的纯净原生质体, 同时避免收集过程中原生质体因相互挤压而破碎。

    内容

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      用机械法分离原生质体( )。 A: 原生质产量高 B: 方法简便 C: 局限性较小 D: 原生质体活力比较强

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      原生质体是原生质的表现形式,原生质是原生质体的实质

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      原生质体的分离方法有和。

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      原生质体分离的方法有______ 和______ 。

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      名词解释:原生质和原生质体