请列举三种蛋白质分子量的测定方法,并简述其原理。
(1)测定蛋白质分子量的方法很多,例如渗透、折散速率,沉降分析等,主要的分子量的测定方法有:①沉降法:又称超速离心法,蛋白质溶液经高速离心时由于比重关系,蛋白质分子趋于下沉,沉降速度与蛋白质颗粒大小成正比,利用[tex=9.5x1.286]GpxaGoowqaWU7YdFs6pLuNR1/umXGxfHQZyYAFZaeZg=[/tex]即可求出其分子量m。②凝胶过滤法:又称分子排阻层析或分子筛层析法,在层析柱中装入葡聚糖凝胶,这种凝胶颗粒中具有微孔,这些微孔只允许较小的分子进入胶粒,而大于胶粒微孔的分子则不能进入而被排阻,当用洗脱液洗脱时,被排阻的分子质量大的蛋白质先被洗脱下来,分子质量小的后下来,根据检测样品的洗脱体积可以求出其分子量。③SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法:蛋白质在SDS聚丙烯酰胺凝胶中电泳的速度取决于分子质量的大小。根据蛋白质分子在电泳中的相对迁移率和分子质量的对数成直线关系,可以求出蛋白质分子量。(2)测定蛋白质相对分子质量的最重要的方法是利用超速离心机的沉降速度法和沉降平衡法。沉降系数(s)的定义是单位离心场强度的沉降速度。s也常用来近似地描述生物大分子的大小。凝胶过滤是一种简便的测定蛋白质分子量的方法。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)用于测定单体蛋白质或亚基的分子量。
举一反三
内容
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如果一个相对分子质量为12000的蛋白质,含10种氨基酸,并假设每种氨基酸在该蛋白质分子中的数目相等,问这种蛋白质有多少种可能的排列顺序?
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简述SDS- PAGE电泳测定未知蛋白分子量的方法。
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列举后门的三种程序,并阐述其原理和防御方法。
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列举两种蛋白质的分离纯化方法,并分别阐明其原理。
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SDS-PAGE电泳测定蛋白分子量原理。