获得目的基因有几种主要方法?
目的基因是指人们所需要转移或改造的基因。 目的基因可以从以下几个途径获得:(1) 限制性内切酶酶切产生待克隆的DNA片段(包括鸟枪法)①限制酶对DNA的切割方式有两种方式, 完全酶切或部分酶切。 限制酶的完全酶切(降解) 是指用识别序列为6个核苷酸的限制酶使DNA完全水解, 所获得的的酶切片段重复性好, 能得到特征性的酶切图谱。 限制酶的部分酶切指用识别序列为4个核苷酸的限制酶使DNA完全水解, 获得一些随机片段。 常用于构建基因文库。②鸟枪法是指用限制性内切核酸酶对生物体基因组DNA完全酶切, 所获得的基因不经过凝胶电泳分离就直接与克隆载体作连接反应的方法。(2) 人工合成DNA这种方法是建立在DNA序列分析基础上, 根据已知的氨基酸序列, 可以按图纸先合成一个个含少量([tex=3.286x1.286]0fiuX/wP8dwehR/SFonbwQ==[/tex]个) 核苷酸的DNA片段, 再利用碱基对互补的关系使它们形成双链片段, 然后用连接酶把双链片段逐个按顺序连接起来, 使双链逐渐加长, 最后得到一个完整的基因。(3) 反转录酶促合成法该途径是一种克隆繁殖已知组成和功能的DNA片段, 把含有目的基因的mRNA的多聚核糖体提取出来, 分离出mRNA, 然后以mRNA为模板, 用反转录酶合成mRNA互补的DNA, 即cDNA单链, 再以此单链为模板, 在反转录酶或DNA聚合酶Ⅰ 合成出互补链, 成为双链DNA分子。(4) 聚合酶链式反应扩增特定的基因片段PCR扩增DNA的专一性片段取决于位于待扩增片段两端的两个寡核苷酸引物, 它们分别与两条互补链杂交。 在引物的定向作用下, 高温DNA聚合酶能催化合成两个引物之间的区域。
举一反三
内容
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重组DNA技术用来获得目的基因的方法有
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获得目的基因的方法有( )。 A: 从基因组文库中分离目的基因 B: 从cDNA文库中获得目的基因 C: 利用化学合成反应合成目的基因 D: 利用PCR快速扩增目的基因 E: 通过限制性内切酶进行切割
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化学合成是获得目的基因最好方法
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什么是目的基因?获得目的基因的途径有哪些?
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获得目的基因的方法有()。 A: 从基因文库中获得 B: 通过反转录获得cDNA C: PCR获得 D: 人工化学合成